問(wèn)   題

原   因

解 決 方 法

在用反相SPE柱萃取時(shí)，洗脫餾份中有水。

1. 分析物洗脫之前SPE柱沒(méi)有很好的干燥。

1. 用氮?dú)饣蚩諝飧稍颯PE柱：用20-100微升含60-90%甲醇的水將SPE柱上的殘留水分除去。

zui后餾份中含有干擾物。

1. 干擾物與分析物被同時(shí)洗脫。

2. 干擾物來(lái)自SPE柱。

1. 在洗脫分析物之前選用中等極性的溶劑將干擾物洗滌出SPE柱?？蓪煞N或更多中兼容的溶劑混合以達(dá)到不同的極性。

選用對(duì)分析物親合力更大而對(duì)干擾物親合力低的SPE柱。

用兩根不同極性的SPE柱以除去干擾物。如反相柱然后離子交換柱或硅膠柱。

 2. 在柱子預(yù)處理之前用洗脫溶劑洗滌SPE柱。

SPE柱流速降低或阻塞。

1. 樣品存在過(guò)多的顆粒。

2. 樣品溶液粘度太大。

1. 對(duì)樣品進(jìn)行過(guò)濾或離心。

2. 用溶劑對(duì)樣品進(jìn)行稀釋。

反相柱從固態(tài)樣品中用萃取非極性分析物。

1. 分析物不在液體溶液中。

1. 用甲醇、異丙醇或乙腈對(duì)樣品進(jìn)行均漿處理。然后過(guò)濾或離心，再用水對(duì)清液進(jìn)行稀釋為含水量為70-90%的水溶液。

用正相柱從固態(tài)樣品中萃取分析物。

1. 分析物不在液體溶液中。

1. 用非極性溶劑 (如: 正己烷、石油醚、氯仿等)均漿。

用正相柱從脂肪樣品中萃取分析物。

1. 脂肪可與分析物一起被洗脫出來(lái)或降低SPE柱的吸附容量。

1. 用正己烷溶解脂肪。冰凍除去凝結(jié)的脂肪。

用反相柱從含蛋白質(zhì)的溶液中(、清、漿)萃取分析物。

1. 分析物與蛋白質(zhì)鍵合使分析物通過(guò)SPE柱而沒(méi)有被保留。

1. 通過(guò)改變樣品的pH值或用水對(duì)樣品稀釋破壞蛋白鍵合。

2. 加酸除蛋白質(zhì) (如: HCIO4、TFA、TCA)。

3. 加有機(jī)溶劑除蛋白質(zhì) (如: 乙腈、丙酮或甲醇)。離心、然后用水或緩沖溶液將上清液稀釋至有機(jī)溶劑含量少于10%。

從含有表面活性劑的溶液中萃取分析物。

1. 表面活性劑與SPE柱表面起作用。

1. 如果分析物是非離子狀態(tài)，可用離子交換柱除去表面活性劑離子。

2. 用二醇基柱除去非離子化的表面活性劑。

用常規(guī)柱 (60?)萃。取蛋白質(zhì)的回收率低。

1. 蛋白質(zhì)體積太大不能進(jìn)入萃取柱的微孔。

2. 蛋白質(zhì)不可逆地被吸附在反相SPE柱上。蛋白質(zhì)在SPE柱擔(dān)體微孔內(nèi)變性。

1. 用BAKERBOND大孔徑反相柱或離子交換柱。

2. 用BAKERBOND大孔徑反相柱或離子交換柱。

分析物回收率低

被吸附在萃取柱上

(如分析物與基液一起通過(guò)SPE柱)      

1. SPE柱沒(méi)有很好地被預(yù)處理。

2. SPE柱的極性不合適。

3. 分析物對(duì)樣品溶液的親合力遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于對(duì)SPE柱的親合力。

4. 當(dāng)大體積水樣品。

5. 通過(guò)SPE柱時(shí)，反相柱擔(dān)體失去柱子預(yù)處理時(shí)留下的甲醇。

1. 反相柱: 用甲醇、異丙醇或乙腈處理柱子，然后用稀釋樣品的溶劑處理柱子。注意不能讓SPE柱變干。

2. 選擇對(duì)分析物有明顯選擇性的SPE柱。

3. 改變極性或樣品溶液的pH使分析物在樣品溶液中的親合力降低。

4. 在樣品溶液中加入1-2%的甲醇或異丙醇或乙腈。

分析物回收率低

分析物沒(méi)有被洗脫出SPE柱                

1. SPE柱的極性不合適。

2. 洗脫溶劑不夠強(qiáng)，無(wú)法將分析物從SPE柱上洗脫。

3. 洗脫溶劑體積太小

4. 分析物被不可逆地吸附在SPE擔(dān)體上。擔(dān)體-分析物作用力太強(qiáng)。

1. 選擇其它低極性或選擇性弱的SPE柱。

2. 改變洗脫溶劑的pH值以增加其對(duì)分析物的親合力。

3. 增加溶劑體積。

4. 反相: 選擇疏水性弱的擔(dān)體。如果原來(lái)用的是C18，則改為C8、C2或CN。

陽(yáng)離子交換: 用羧酸取代苯磺酸。

陰離子交換: 用伯、仲胺代替叔胺。

萃取重現(xiàn)性差

1. 在添加樣品之前SPE柱已枯。

2. SPE柱超容量。

3. 樣品過(guò)柱流速太快。

 4. 洗脫液流速太快。

 5. 分析物在樣品中的溶解度太大，分析物在樣品過(guò)柱時(shí)與樣品同時(shí)通過(guò)柱子而沒(méi)有被保留。

6. SPE柱用極性溶劑處理而洗脫溶劑是不兼容的非極性溶劑。

 7. 洗滌雜質(zhì)用的溶劑太強(qiáng)，部分分析物與雜質(zhì)同時(shí)被從SPE柱洗滌。分析物在這一步損失的多少取決于洗滌溶劑的流速、SPE的特性以及洗滌溶劑的體積。

8. 洗脫劑的體積太小。

1. 重新進(jìn)行SPE柱預(yù)處理。

2. 減少樣品量或選擇大容量柱。

3. 降低流速。特別是離子交換時(shí)流速應(yīng)低于5 mL/min。

4.在使用外力之前讓洗脫液滲透過(guò)柱。兩次500微升洗脫可能比一次1000微升更有效。

 5. 通過(guò)改變樣品極性或pH值而改變分析物的溶解度。

6. 在使用非極性溶劑之前對(duì)SPE柱進(jìn)行干燥。

7. 降低洗滌溶劑的強(qiáng)度。

8.  增加洗脫溶劑的體積。