長春水套式CO2培養(yǎng)箱HH.CP-TW細胞培養(yǎng)

包括營養(yǎng)液、胰酶、清等。

清特別重要。清必須貯存于 –20℃，如果一次無法用完一瓶，可將 40～50ml 分裝于無菌酸處理瓶中，甚至置青霉素瓶保存。一般廠商提供的清為無菌，不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)清有許多懸浮物，則可將清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾，勿直接過濾清。（一般情況下不影響細胞培養(yǎng)）

瓶裝清一定要逐步解凍: 4℃ 冰箱全溶后再分裝，在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由 –20℃ 直接至 37℃ 解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。

熱滅活是指 56℃，30 分鐘加熱已*解凍之清。水浴鍋升到 56℃后，將清放入，待溫度升高到 56℃ 后計時，一般 5 分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使清中之補體成份去活化。除非必須，一般不要作此熱處理，因為會造成沉淀物之顯著增多，且會影響清之品質(zhì)。注意更換新清（包括不同批次）對細胞的影響。

7、無菌意識要強

實驗進行前，超凈臺以紫外燈照射 30 分鐘滅菌，以 70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面，并開啟超凈工作臺風扇運轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后，才開始實驗操作。

每次操作只處理一株細胞株，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以 70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面。

無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暫時放置，其它個人實驗用品用完應(yīng)立即拿出。實驗用品以 70% 乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作應(yīng)在中央無菌區(qū)域，一般勿在邊緣區(qū)域操作。

小心取用無菌之實驗物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約 45° 角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。

長春水套式CO2培養(yǎng)箱HH.CP-TW細胞培養(yǎng)技術(shù)參數(shù):

準備

    細胞凍存液（20%清、10%DMSO、70%基礎(chǔ)培養(yǎng)液），梯度降溫盒

（2） 步驟

        1.選取活力好，密度約70%細胞用于凍存，此時細胞處于對數(shù)生長期，適合用于凍存。

        2 .細胞吹打或者胰酶消化后，轉(zhuǎn)移至無菌EP管，1000rpm里面5min。

        3.棄上清，加入新鮮配制的細胞凍存液，25T細胞可以加入2ml細胞凍存液，分裝2個凍存管，細胞密度為5*106-1*107個每ml。

        4.做好標記，放入梯度降溫盒（提前平衡至室溫）。

        5.將梯度降溫盒放入-80℃冰箱過夜，第二天取出凍存管，快速放入液氮保存。

氧化碳培養(yǎng)箱是進行細胞培養(yǎng)的必要設(shè)備，那么在培養(yǎng)細胞時有哪些經(jīng)驗是我們可以借鑒的呢？下面讓我們一起來看一下。

1、啟蒙老師的重要性

一般進實驗室都有師兄師姐帶著做，他們就是你做細胞的啟蒙老師。他們的操作手法、細節(jié)、理論講解就成了你操作的準則，如營養(yǎng)液、細胞瓶的擺放位置；滅菌處理程序；開蓋手法；細胞吹打手法等等。要學會他們的正確操作，在*次的時候就要重視。

2、像養(yǎng)孩子一樣養(yǎng)細胞

細胞真的很脆弱，每天都去看看它，以防止出現(xiàn)培養(yǎng)箱缺水、缺二氧化碳、停電、溫度不夠等異?，F(xiàn)象，也好及時解決這些意外，避免重復(fù)實驗帶來的更大痛苦。

3、好細胞要及時保種

細胞要分批傳代，這樣即使有一批出了問題，還有一批備用的。像后者一般人可能不容易做到。有一次細胞污染了，全軍覆沒。當時可后悔沒有保種。

4、每種細胞都有自己的特性，要區(qū)別對待。

細胞跟人一樣，不同的細胞，培養(yǎng)特性是不一樣的。培養(yǎng)過程中要細細體會。不同細胞株使用不同的培養(yǎng)基和清。

如平滑肌細胞很活躍，喜歡熱鬧，2~3 天就好多人口，而且不太愛吃喝，真是養(yǎng)的孩子了。內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞性格相近，不過它很不講，也很邋遢，里面有很多分泌屋，要經(jīng)常換洗才行。RAW264.7 細胞也很開朗，而且很能吃，要經(jīng)常喂它，頭疼的是細胞很容易活化，培養(yǎng)它的瓶子和環(huán)境沒有內(nèi)毒素才好。