煙臺(tái)CO2培養(yǎng)箱HH.CP-T二氧化碳箱如何用二氧化碳培養(yǎng)箱進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇、傳代及凍存實(shí)驗(yàn)一  復(fù)蘇 傳代

（1） 準(zhǔn)備

   無(wú)菌超凈臺(tái)，酒精燈，75%酒精噴壺，二氧化碳培養(yǎng)箱，37℃水浴鍋，離心機(jī)；培養(yǎng)瓶，含10%胎牛清的*培養(yǎng)基和基礎(chǔ)培養(yǎng)基以及PBS磷酸緩沖液（提前放置超凈臺(tái)使平衡到室溫），無(wú)菌工作服（白大褂），口罩，手套，記號(hào)筆

（2） 步驟

   1.穿好無(wú)菌工作服，帶上口罩和手套，快速?gòu)囊旱锶〕鰞龃婀?，快速放進(jìn)37℃水浴鍋緩慢搖晃使細(xì)胞解凍，注意凍存管的封口膜不要破裂，防止污染。

   2.解凍后用紙擦干凍存管表面的水滴，酒精噴壺噴灑適量75%酒精消毒凍存管封口處。

   3.開(kāi)超凈臺(tái)，點(diǎn)燃酒精燈燃燒片刻后（可提前準(zhǔn)備），凍存管放超凈臺(tái)，換新手套，小心打開(kāi)凍存管，避免污染，無(wú)菌吸管將1ml細(xì)胞全部吸出至5ml無(wú)菌EP管，補(bǔ)加9ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基稀釋?zhuān)?000rpm，離心5min使細(xì)胞沉淀，棄上清。

   4.加入新鮮配制的含10%清的培養(yǎng)基4ml，輕輕混勻，用吸管將細(xì)胞移至25T培養(yǎng)瓶。

   5.平躺放置培養(yǎng)瓶，8字形混勻后，置于37℃，5%二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

   6.培養(yǎng)24小時(shí)后，顯微鏡觀察細(xì)胞（貼壁細(xì)胞）貼壁后，小心更換培養(yǎng)基，根據(jù)不同細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)進(jìn)行傳代培養(yǎng)，培養(yǎng)瓶上標(biāo)記：操作者，時(shí)間，細(xì)胞類(lèi)型。

煙臺(tái)CO2培養(yǎng)箱HH.CP-T二氧化碳箱技術(shù)參數(shù):

推薦的二氧化碳培養(yǎng)箱使用注意事項(xiàng)

　　1、二氧化碳培養(yǎng)箱未注水前不能打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，否則會(huì)損壞加熱元件。

　　2、培養(yǎng)箱運(yùn)行數(shù)月后，水箱內(nèi)的水因揮發(fā)可能減少，當(dāng)?shù)退恢甘緹簦╓Low12）亮?xí)r應(yīng)補(bǔ)充加水。先打開(kāi)溢水管，用漏斗接橡膠管從注水孔補(bǔ)充加水使低水位指示燈熄滅，再計(jì)量補(bǔ)充加水（CP-ST200A加水1800ml，CP-ST100A加水1200ml），然后堵塞溢水孔。

　　3、二氧化碳培養(yǎng)箱可以做高精度恒溫培養(yǎng)箱使用，這時(shí)須關(guān)閉CO2控制系統(tǒng)。

　　4、因?yàn)镃O2傳感器是在飽和濕度下校正的，因此加濕盤(pán)必須時(shí)刻裝有滅菌水。

　　5、當(dāng)顯示溫度超過(guò)置定溫度1℃時(shí)，超溫報(bào)警指示燈（OverTemp7）亮，并發(fā)出尖銳報(bào)警聲，這時(shí)應(yīng)關(guān)閉電源30分鐘;若再打開(kāi)電源（溫控）開(kāi)關(guān)（Power20）仍然超溫，則應(yīng)關(guān)閉電源并報(bào)維修人員。

　　6、鋼瓶壓力低于0.2MPa時(shí)應(yīng)更換鋼瓶。

　　7、盡量減少打開(kāi)玻璃門(mén)的時(shí)間。

　　8、如果二氧化碳培養(yǎng)箱長(zhǎng)時(shí)間不用，關(guān)閉前必須清除工作室內(nèi)水分，打開(kāi)玻璃門(mén)通風(fēng)24小時(shí)后再關(guān)閉。

　　9、清潔二氧化碳培養(yǎng)箱工作室時(shí)，不要碰撞傳感器和攪拌電機(jī)風(fēng)輪等部件。

　　10、拆裝工作室內(nèi)支架護(hù)罩，必須使用隨機(jī)扳手，不得過(guò)度用力。

　　11、搬運(yùn)培養(yǎng)箱前必須排除箱體內(nèi)的水。排水時(shí)，將橡膠管緊套在出水孔上，使管口低于儀器，輕輕吸一口，放下水管，水即虹吸流出。

　　12、搬運(yùn)二氧化碳培養(yǎng)箱前應(yīng)拿出工作室內(nèi)的擱板和加濕盤(pán)，防止碰撞損壞玻璃門(mén)。

　　13、搬運(yùn)培養(yǎng)箱時(shí)不能倒置，同時(shí)一定不要抬箱門(mén)，以免門(mén)變形。

         二氧化碳培養(yǎng)箱是免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、遺傳學(xué)及生物工程所必須的關(guān)鍵設(shè)備，廣泛應(yīng)用于微生物、農(nóng)業(yè)科學(xué)、藥物學(xué)的研究和生產(chǎn)。